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龙图腾网获悉南京品生医疗科技有限公司;南京品生医学检验实验室有限公司;武汉品生医药科技有限公司;福州品生医疗科技有限公司;福建品生万福医学检验有限公司;陕西品生致吉医学科技有限公司申请的专利高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116297993B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-02发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310499646.8，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒是由李美娟;成晓亮;盛蔚;吴启楠;张伟设计研发完成，并于2023-05-06向国家知识产权局提交的专利申请。

本高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒在说明书摘要公布了：本发明涉及一种高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒，在检测红细胞中叶酸及其代谢物的含量，解决了对红细胞定量的难题，整个待测样本的前处理过程简单，灵敏度高，样本用量小，特异性强，7.0分钟之内可同时检测红细胞中5种叶酸及其代谢物，可用于临床上红细胞中5种叶酸及其代谢物的诊断及健康评估。

本发明授权高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的试剂盒在权利要求书中公布了：1.试剂盒在利用高效液相色谱串联质谱测定红细胞中叶酸及其代谢物的应用， 所述叶酸及其代谢物分别为：叶酸、5-甲基四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸、黄素腺嘌呤二核苷酸和维生素B3； 上述叶酸及其代谢物对应的同位素内标物分别为：叶酸-d4、5-甲基四氢叶酸-d4、5-甲酰四氢叶酸-d4、黄素腺嘌呤二核苷酸-d5和维生素B3-d4； 所述的试剂盒包含如下试剂： （1）电解质浓缩液A：40~60%甲酸-水溶液； （2）电解质浓缩液B：40~60%甲酸-甲醇； （3）混合标准S0溶液： 包含有2μmolL叶酸、20μmolL5-甲基四氢叶酸、4μmolL5-甲酰四氢叶酸、40μmolL黄素腺嘌呤二核苷酸和2000μmolL维生素B3的甲醇水溶液； （4）内标SI溶液： 包含有0.2μmolL叶酸-d4、2μmolL5-甲基四氢叶酸-d4、0.4μmolL5-甲酰四氢叶酸-d4、4μmolL黄素腺嘌呤二核苷酸-d5和40μmolL维生素B3-d4的甲醇水溶液； （5）保护剂：1%~3%VC溶液； （6）pH调节剂：1M~5MNaOH溶液； （7）裂解液：含0.3~1.0unitml谷氨酰水解酶的水溶液； 试剂盒在使用时，将内标SI溶液加入甲醇稀释成混合内标工作溶液，具体配制方法如下：取100µL混合内标SI溶液，加入900µL甲醇，混合均匀即为混合内标工作液； 待测样本经前处理后，利用高效液相色谱将目标待测物与样本基质中的干扰组分进行分离，再通过质谱仪检测目标待测物与其对应同位素内标的质荷比的响应，使用同位素内标法定量，分别计算出5种红细胞叶酸及其代谢物的含量，具体色谱条件为： （a）高效液相色谱条件： 流动相A：0.05~0.2%甲酸-水溶液； 流动相B：0.05~0.2%甲酸-甲醇； 色谱柱：KinetexXB-C18，所述色谱柱的长度为100mm，直径为3.0mm，填料粒径为2.6μm； 采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，所述梯度洗脱过程如下：在0-0.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为70:30；在0.5-2.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由70:30匀速渐变至40:60；在2.0-3.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由40:60匀速渐变至2:98；在3.0-5.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比为2:98；在5.0-5.01分钟内，流动相A和流动相B的体积比由2:98匀速渐变至70:30；在5.01-7.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比为70:30； （b）质谱条件： 在电喷雾电离模式下，采用多反应监测进行正离子模式扫描；毛细管电压为3.0kV，喷嘴电压为200V；干燥气温度为300℃，鞘气温度为350℃，干燥气流速为10Lmin，鞘气流速为11Lmin，雾化气压力45psi；同时监测5种红细胞中叶酸及其代谢物与对应同位素内标； 所述待测样本为含EDTA抗凝剂的血液样本经过离心分离去除血浆得到的红细胞；其中， 待测样本的前处理按照如下方法制备：取待测红细胞样本，加入混合内标工作液、保护剂和pH调节剂，涡旋后加入裂解液，避光孵育后，再加入蛋白质沉淀剂，振荡离心后取上清液待进样；所述蛋白质沉淀剂为体积比为1~4:1的甲醇-乙腈混合溶液。

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