中国科学院水生生物研究所王晶获国家专利权
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龙图腾网获悉中国科学院水生生物研究所申请的专利一种靶向mylipb基因构建耐低氧团头鲂的基因编辑方法和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118956867B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411034146.8,技术领域涉及:C12N15/113;该发明授权一种靶向mylipb基因构建耐低氧团头鲂的基因编辑方法和应用是由王晶;肖武汉;李俊设计研发完成,并于2024-07-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种靶向mylipb基因构建耐低氧团头鲂的基因编辑方法和应用在说明书摘要公布了:本发明涉及基因工程技术领域,尤其涉及一种靶向mylipb基因构建耐低氧团头鲂的基因编辑方法和应用。本发明提供了一种靶向mylipb基因的gRNA,以及其和Cas9蛋白所组成的组合物,可以用于敲除mylipb基因。本发明还提供了一种基于CRISPRCas9体系靶向团头鲂mylipb基因的基因编辑方法,包括设计靶点序列、制备gRNA,以及将gRNA和Cas9蛋白的组合物体外显微注射至受精卵,得到F0代突变体。F0代自交得到F1代,经基因型确认得到基因敲除杂合子团头鲂,所述杂合子团头鲂经表型鉴定为更耐低氧的种质材料。本发明所提供的育种方法较于传统方法有显著优势,实现了迅速且准确地定向改造生物性状,并极大地缩短了育种周期,提高了育种效率,具有重要的应用价值。
本发明授权一种靶向mylipb基因构建耐低氧团头鲂的基因编辑方法和应用在权利要求书中公布了:1.一种mylipb基因敲除构建耐低氧团头鲂的方法,其特征在于,包括步骤: b1敲除野生型团头鲂的mylipb基因,其步骤如下: a1设计mylipb基因靶点,其打靶序列如SEQIDNO:1所示; a2根据mylipb基因靶点设计gRNA的特异性引物,进行PCR扩增获得模板DNA,再通过T7聚合酶体外转录,制备得CRISPRCas9体系的gRNA; a3将gRNA和Cas9蛋白的组合物体外显微注射至野生型团头鲂受精卵中,通过基因型检测筛选mylipb基因敲除的F0代; 所述PCR扩增的模板为pUC19-gRNA质粒,引物序列分别如SEQIDNO: 2-3所示;所述野生型团头鲂受精卵为I细胞期受精卵; b2将所筛选的发生突变的F0代中的雌雄个体进行交配,获得F1代,F1代中基因型检测为mylipb基因突变的团头鲂为耐低氧团头鲂。
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