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龙图腾网获悉华中农业大学申请的专利一种鉴别中国甜柿基因型的方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118895386B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-02发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411314008.5，技术领域涉及：C12Q1/6895；该发明授权一种鉴别中国甜柿基因型的方法及其应用是由陈文兴;马渝婷;游文娟;余思睿;罗正荣;张青林;徐莉清;郭大勇设计研发完成，并于2024-09-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种鉴别中国甜柿基因型的方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种鉴别中国甜柿基因型的方法及其应用，属于基因型鉴别技术领域。本发明提供的鉴别中国甜柿基因型的方法，通过探针与目标分子之间发生特异性的水解反应方可生成荧光信号，误差更小，鉴别结果更准确，结果稳定性更高；只需要两个参考基因组，鉴定易操作，可以大幅降低中国甜柿基因型鉴别的工作量，试剂耗材等的消耗更少，鉴别成本更低；可以大幅缩短鉴别所需时间，提高鉴别效率，对中国甜柿基因型的鉴定可以为杂交亲本的选择提供参考，还可用于幼株的胚拯救、绿木嫁接和杂交组合的标记辅助选择，大幅提高PCNA育种效率，对育成具知识产权的完全甜柿新品种、甜柿品种改良具有重要意义。

本发明授权一种鉴别中国甜柿基因型的方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种鉴别中国甜柿基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、提取中国甜柿标准样品的基因组DNA，根据中国甜柿自然脱涩位点CPCNA区间、参考基因序列设计特异性引物和Taqman特异探针，将特异性引物和Taqman特异探针序列信息送公司合成； S2、将获得的中国甜柿标准样品的基因组DNA倍比稀释成不同的浓度，然后分别与中国甜柿自然脱涩位点CPCNA区间、参考基因特异性引物和Taqman特异探针混合进行实时荧光定量PCR反应，得到不同DNA浓度下的Ct值； S3、利用得到的中国甜柿标准样品不同DNA浓度、不同特异性引物和Taqman特异探针下的Ct值，建立标准曲线； S4、提取待测柿材料的基因组DNA，并稀释成确定浓度，分别与中国甜柿自然脱涩位点CPCNA区间、参考基因特异性引物和Taqman特异探针混合后进行实时荧光定量PCR反应，获得不同特异性引物和Taqman特异探针下的Ct值，将获得的Ct值分别代入S3建立的标准曲线中，即可计算得到待测柿材料的基因型； 所述S1中中国甜柿标准样品为‘小果甜柿’，参考基因为DkAct、L5R；中国甜柿自然脱涩位点CPCNA区间特异性引物的上游引物序列如SEQIDNO.1所示，下游引物序列如SEQIDNO.2所示，Taqman特异探针的序列如SEQIDNO.3所示；DkAct基因的特异性引物的上游引物序列如SEQIDNO.4所示，下游引物序列如SEQIDNO.5所示，Taqman特异探针序列如SEQIDNO.6所示；L5R基因的特异性引物的上游序列如SEQIDNO.7所示，下游引物序列如SEQIDNO.8所示，Taqman特异探针序列如SEQIDNO.9所示； 所述S4中计算待测柿材料基因型，采用以下公式进行： CPCNA相对等位基因剂量=CPCNA连锁标记的相对DNA用量参考基因的相对DNA用量×6； 式中，CPCNA连锁标记的相对DNA用量为：将待测柿材料利用中国甜柿自然脱涩位点CPCNA特异性引物、Taqman特异探针，进行实时荧光定量PCR得到的Ct值，代入中国甜柿自然脱涩位点CPCNA区间标准曲线计算得到的数值； 参考基因的相对DNA用量为：将待测柿材料利用参考基因特异引物与Taqman特异探针，进行实时荧光定量PCR得到的Ct值，代入参考基因标准曲线计算得到的数值； 当CPCNA相对等位基因剂量小于0.5时，待测柿材料的基因型为bbbbbb；当CPCNA相对等位基因剂量大于等于0.5小于1.5时，待测柿材料的基因型为Bbbbbb；当CPCNA相对等位基因剂量大于等于1.5小于2.5时，待测柿材料的基因型为BBbbbb，以此类推，当CPCNA相对等位基因剂量大于等于5.5小于6.5时，待测柿材料的基因型为BBBBBB。

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