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山东东方海洋科技股份有限公司田萍萍获国家专利权

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龙图腾网获悉山东东方海洋科技股份有限公司申请的专利一种利用二倍体雌配子体孤雌生殖进行海带苗种培育的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120391321B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510908732.9,技术领域涉及:A01G33/00;该发明授权一种利用二倍体雌配子体孤雌生殖进行海带苗种培育的方法是由田萍萍;李言;陈书秀;李晓捷;孙娟;赵聚萍;王利芹;史良;赵楠;李霞设计研发完成,并于2025-07-02向国家知识产权局提交的专利申请。

一种利用二倍体雌配子体孤雌生殖进行海带苗种培育的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种利用二倍体雌配子体孤雌生殖进行海带苗种培育的方法,属于水产工程遗传育种领域。将诱导丝状体的雌、雄单细胞克隆系杂交,获得四倍体孢子体。四倍体孢子体成熟放散游孢子,萌发形成二倍体配子体,后进行雌雄分离批量获得二倍体雌性配子体克隆系。在本发明提供的培养条件下,利用二倍体雌配子体克隆系孤雌生殖进行苗种培育。这种二倍体雌配子体6~7d就开始排卵,比同期同条件下单倍体配子体的排卵时间显著要早。12d排卵率达到86.5%,24d孢子体转化率达到98.3%,且大部分孢子体形态正常。在育苗期间,二倍体雌配子体完成了孤雌生殖育苗。二倍体雌配子体可作为一种全新的海带种质材料应用于海带苗种培育。

本发明授权一种利用二倍体雌配子体孤雌生殖进行海带苗种培育的方法在权利要求书中公布了:1.一种利用二倍体雌配子体孤雌生殖进行海带苗种培育的方法,其特征在于步骤如下: (1)批量获得海带二倍体雌配子体; (1.1)二倍体诱导丝状体单细胞克隆系的建立:将作为体细胞来源的海带诱导丝状体研磨,过滤;在10±1°C,10~20μmol·m-2·s-1和光源为白光、每日24h光照下培养;3~5天后将单细胞吸出,移入容器中培养;在10±1°C,25~35μmol·m-2·s-1和光源为白光、每日24h光照下培养;待长至直径为2~5mm的细胞团,将这些细胞团再次研磨,收集至另一容器中培养至所需量; (1.2)四倍体海带的培育及海上养成:取表型雌性的海带诱导丝状体的单细胞克隆系为母本,取表型雄性的海带诱导丝状体的单细胞克隆系为父本,将母本和父本克隆以2:1的质量比例混合,喷洒在白色维尼纶绳编织的苗帘上;在8±1℃环境温度下进行苗种培育;幼苗长度在1.5~2.0cm时下海暂养及夹苗养成; (1.3)批量地获得海带二倍体雌雄配子体:取步骤(1.2)养成的四倍体海带成熟的孢子囊块,杀菌消毒冲洗后,置于6~8℃的光照培养箱中避光阴干刺激2~5h;等游孢子密度达到100×镜下每个视野有5~10个时停止放散,去除孢子囊块,置于光照培养箱中培养,在10±1°C,20~30μmol·m-2·s-1和光源为白光、每日24h光照下培养20~30天; 在显微镜下将雌吸出,移入容器中培养;在10±1°C,30~40μmol·m-2·s-1和光源为白光、每日24h光照下培养;待细胞段长至直径3~5mm的细胞团,将这些细胞团再次研磨,收集至容器中培养至所需量; (2)海带二倍体雌配子体孤雌生殖苗种培育; (2.1)孤雌生殖:打碎二倍体雌配子体,过滤到2%PES培养基中培养;温度、光照强度及光周期均为10±1℃、40~50μmolphotons·M-2·s-1、10L:14D; (2.2)孤雌生殖育苗:将二倍体雌配子体作为亲本在育苗库进行孤雌生殖育苗,孤雌生殖育苗培养基为2%PES培养基,光源均为白光; 所述的2%PES培养基按照以下步骤制备而成: 一、贮备液配制 配制贮备液1:取H3BO31.9g,FeCl30.05g,MnSO4·H2O0.273g,ZnSO4·7H2O0.0367g,CoSO4·7H2O0.008g,0.5MpH8的EDTA溶液11.4mL,用蒸馏水溶解后定容至1000mL;并配制贮备液2:称取维生素B123.35mg,维生素B1165mg,生物素1.65mg,TRIS166.5g,用蒸馏水溶解定容至500mL;并配制贮备液3:称取六水合硫酸亚铁铵1.7g,0.5molLpH8的EDTA溶液6.8mL,用蒸馏水溶解后定容至1000mL;并配制贮备液4:称取硝酸钠23g,用蒸馏水溶解定容至1000mL;并配制贮备液5:称取五水合甘油磷酸钠3.33g,用蒸馏水溶解定容至1000mL;并配制0.5M、pH8的EDTA溶液:称取6.5g氢氧化钠,加入75mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,加入14.6gEDTA,继续搅拌至完全溶解,用氢氧化钠调节pH至8.0,用蒸馏水将溶液定容至100mL 二、2%PES培养基配制 首先配制PES贮备液:分别取100mL贮备液1、贮备液3、贮备液4和贮备液5及10mL贮备液2,用蒸馏水溶解,调节pH值至7.8,并用蒸馏水定容至1000mL;然后2%PES培养基配制:取2mLPES贮备液,用高压蒸汽灭菌海水溶至100mL,再次灭菌备用。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人山东东方海洋科技股份有限公司,其通讯地址为:264003 山东省烟台市莱山区澳柯玛大街18号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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