中国科学院天津工业生物技术研究所田朝光获国家专利权
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龙图腾网获悉中国科学院天津工业生物技术研究所申请的专利一种基于流式细胞术的免涂板操作的菌株工程改造的方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116135979B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-29发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202111352181.0，技术领域涉及：C12N15/80；该发明授权一种基于流式细胞术的免涂板操作的菌株工程改造的方法及应用是由田朝光;王兴吉;刘倩;杨玉净;刘音;刘丹丹;郭文柱;孙涛;孙文良设计研发完成，并于2021-11-16向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于流式细胞术的免涂板操作的菌株工程改造的方法及应用在说明书摘要公布了：本发明构建了一种基于流式细胞术的免平板操作的菌株工程改造的方法，将将带有选择性标记基因的DNA序列的转化进入目的真菌原生质体基因组中、流式细胞仪分选、深孔板培养、以及表型快速分析步骤结合起来。可直接用于丝状真菌遗传转化后的原生质体的筛选和分离，解决了现有丝状真菌技术中铺平板培养、转化子挑选、分生孢子制备以及摇瓶鉴定过程中耗时长、费力、通量低的瓶颈问题。本发明的方法操作方便、省时省力，极大提高丝状真菌工程改造的效率，可便捷有效的进行高通量构建丝状真菌高产工程菌。
本发明授权一种基于流式细胞术的免涂板操作的菌株工程改造的方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种基于流式细胞术的免平板操作的丝状真菌工程改造的方法，其特征在于，包括如下步骤： （1）将带有筛选标记和目标DNA的序列转化进入目的丝状真菌原生质体基因组中；所述筛选标记为选择性标记基因或者带有营养缺陷型基因； （2）转化后获得的原生质体在含相应于所述选择性标记基因的选择性物质的培养液中进行再生和萌发培养，所述再生和萌发培养是指培养8-16小时，获得用于后续筛选的短菌丝形态的转化子，且所述短菌丝形态是指不超过70μm的短菌丝体； （3）利用流式细胞仪检测步骤（2）获得的转化子直接分选至深孔板中进行发酵培养，所述深孔板是具有高通量筛选作用的培养器皿； （4）分析检测步骤（3）中分选到深孔板发酵培养的转化子，离心后取出深孔板中上清液进行蛋白测定，比较分泌目标蛋白的相对高低，得到基因工程成功改造的突变菌株； 所述丝状真菌是嗜热毁丝霉或黑曲霉。
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