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龙图腾网获悉上海交通大学申请的专利一种精准分析单细胞APA位点的sc3T-seq方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116083531B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-26发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310082830.2，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权一种精准分析单细胞APA位点的sc3T-seq方法是由康亚妮;文柏清;张伟伟;张飞;何梦菊;张博涵设计研发完成，并于2023-01-18向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种精准分析单细胞APA位点的sc3T-seq方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种精准分析单细胞APA位点的sc3T‑seq方法，涉及分子生物学和生物信息学领域，oligodT20引物与链霉亲和素的磁珠孵育结合，加入少量起始样本和外源单链DNA，双链cDNA合成，双链cDNA断裂，移除polyA，释放带标签的cDNA，加入具有生物素标记的λ‑DNA，加入羧基磁珠，筛选去除外源cDNA，末端修复、加接头、构建cDNA文库，链霉素亲和磁珠去除生物素标记λDNA，得到纯净的样本文库。本发明降低了起始样品量，使分析APA位点的实验技术能够适用于少量样本甚至单个细胞，对于精准检测、分析细胞特异性的APA有很大的作用。

本发明授权一种精准分析单细胞APA位点的sc3T-seq方法在权利要求书中公布了：1.一种精准分析单细胞APA位点的sc3T-seq方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： 步骤1、磁珠与引物探针结合制备GsuⅠ-OligodT20磁珠；设计并合成一种外源单链DNA片段，加入样本中，再加至制备好的所述GsuⅠ-OligodT20磁珠中，mRNA逆转录合成第一链cDNA； 步骤2、将配置好的二链合成体系与重悬好的步骤1得到的第一链cDNA进行合成反应，合成第二链cDNA，得到双链cDNA； 步骤3、片段化酶反应体系重悬步骤2得到的双链cDNA，置于冰上5min后加入5μL双链DNA片段化酶NEB，进行片段化反应，随机断裂新合成的所述双链cDNA，得到断裂后的cDNA； 步骤4、将配制好的消化反应体系加至装有步骤3得到的断裂后的cDNA的离心管中将其重悬，进行酶切反应，3'UTR末端从所述GsuⅠ-OligodT20磁珠上释放得到3'端标签原始文库； 步骤5、将步骤4得到的3'端标签原始文库中加入外源λDNA，纯化所述cDNA片段并去除所述外源单链DNA片段得到DNA标签文库； 步骤6、将步骤5得到的DNA标签文库末端修复得到末端修饰后的DNA，将所述末端修饰后的DNA的3’末端加A尾，与高通量测序接头连接、高保真酶的PCR放大以及文库片段筛选，建库完成后，除去生物素标记的λ-DNA、纯化体系，得到无外源DNA污染的文库；所述引物探针的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示； 所述步骤1中所述外源单链DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示； 所述步骤2中所述二链合成体系的组分为：30μL洗剂1，184μL无酶水，25μL10×二链合成缓冲液，5μL10mM的dNTP，所述dNTP是由100mmolL的dATPdGTPdCTPdUTP按照相应的比例混合得到，1μLDNA连接酶，4μLDNA聚合酶，1μL核糖核酸酶H；其中所述洗剂1的组分为：280μL无酶水，80μL5×一链合成缓冲液，40μL0.1M的二硫苏糖醇；所述步骤3中所述片段化酶反应体系的组分为：水39.5μL，10×片段酶反应缓冲液5μL，100×牛血清白蛋白0.5μL，配套的断裂酶5μL； 所述步骤4中所述消化反应体系的组分为：10×bufferB10μL，0.5mmolLS-腺苷甲硫氨酸2μL，GsuⅠ2μL，双蒸水86μL；其中所述bufferB为GsuⅠ配套的缓冲液，所述GsuⅠ的浓度为5UL；所述步骤5中加入所述外源λDNA的质量为100ng；使用0.9x的磁珠去除所述外源单链DNA片段； 所述步骤6中使用链霉素磁珠除去所述生物素标记的λ-DNA。

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