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龙图腾网获悉南方医科大学南方医院申请的专利膜蛋白双阳性特异细胞外囊泡亚群分离富集方法、试剂盒及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116254225B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-26发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310315720.6，技术领域涉及：C12N5/078；该发明授权膜蛋白双阳性特异细胞外囊泡亚群分离富集方法、试剂盒及其应用是由郑磊;刘春辰;林慧娴;潘炜伦;李博;于海洋;麦雪盈设计研发完成，并于2023-03-27向国家知识产权局提交的专利申请。

本膜蛋白双阳性特异细胞外囊泡亚群分离富集方法、试剂盒及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种膜蛋白双阳性特异细胞外囊泡亚群分离富集方法、试剂盒及其应用。所述方法，包括如下步骤：将待处理的细胞外囊泡EVs样本、两个特异性靶向EVs膜蛋白标志物的抗体核酸复合物与能连接两个抗体核酸复合物的RNA连接链孵育，得到DNA‑RNA杂合体，实现EVs双阳性膜蛋白的捆绑；通过功能化磁珠特异性地捕获DNA‑RNA杂合体，实现膜蛋白双阳性特异EVs亚群的分离；通过酶切核酸链实现膜蛋白双阳性特异EVs亚群的富集。本发明提供的技术可实现膜蛋白双阳性特异EVs亚群无损分离富集，既能保证EVs数量，又能保证质量，还具有通用性，可根据实际需要更换抗体或靶向膜表面分子的识别原件实现双靶标阳性EVs亚群无损分离富集。

本发明授权膜蛋白双阳性特异细胞外囊泡亚群分离富集方法、试剂盒及其应用在权利要求书中公布了：1.一种膜蛋白双阳性特异细胞外囊泡亚群分离富集方法，其特征在于，包括如下步骤： 将待处理的细胞外囊泡样本、两个特异性靶向细胞外囊泡膜蛋白标志物的抗体核酸复合物与能连接两个所述抗体核酸复合物的RNA连接链孵育，得到DNA-RNA杂合体，实现细胞外囊泡双阳性膜蛋白的捆绑； 通过功能化磁珠特异性地捕获所述DNA-RNA杂合体，实现膜蛋白双阳性特异细胞外囊泡亚群的分离，所述功能化磁珠为偶联了能特异识别所述DNA-RNA杂合体的第二抗体的免疫磁珠； 通过酶切核酸链实现膜蛋白双阳性特异细胞外囊泡亚群的富集； 两个所述抗体核酸复合物分别为第一抗体-DNA1偶联物和第一抗体-DNA2偶联物，所述第一抗体-DNA1偶联物为CD9抗体-DNA1偶联物、CD63抗体-DNA1偶联物和CD81抗体-DNA1偶联物；用于分离富集红细胞、白细胞、血小板、血管上皮细胞来源细胞外囊泡的第一抗体-DNA2偶联物分别选自CD235a抗体-DNA2偶联物、CD45抗体-DNA2偶联物、CD41a抗体-DNA2偶联物、CD144抗体-DNA2偶联物； 所述DNA1、DNA2和RNA连接链的序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2和SEQIDNO.5所示； 所述第二抗体选自AbS9.6； 所述酶为核酸内切酶RNaseH。

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