新加坡科技研究局王庭训获国家专利权
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龙图腾网获悉新加坡科技研究局申请的专利测量核酸修饰酶活性的测定获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN114651067B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-22发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202080078223.3,技术领域涉及:C12N15/55;该发明授权测量核酸修饰酶活性的测定是由王庭训;赵伟良设计研发完成,并于2020-10-15向国家知识产权局提交的专利申请。
本测量核酸修饰酶活性的测定在说明书摘要公布了:本申请公开了一种测量核酸修饰酶活性并筛选酶促反应的一个或多个可变元件的多重化方法。该方法包括:i提供编码DNARNA靶位点和待测试的可变元件例如核酸修饰酶变体的多核苷酸构建体文库,ii将多核苷酸构建体的单拷贝与体外转录翻译IVVT试剂一起分区,iii允许在每个隔室中表达核酸修饰酶和DNARNA靶位点的IVVT反应,iv取决于编码的核酸修饰酶的功能性,单个多核苷酸构建体RNA靶标被裂解、保持完整或以其他方式被修饰,和v通过测序对裂解的、完整的或修饰的多核苷酸构建体RNA靶标定量,从而直接鉴定与每个可变元件相关的酶活性并对该酶活性定量。特别地,核酸修饰酶是CRISPR相关蛋白Cas。
本发明授权测量核酸修饰酶活性的测定在权利要求书中公布了:1.一种用于测量核酸修饰酶的活性的方法,包括以下步骤: a将多个多核苷酸构建体分隔到隔室中,其中每个隔室包含单个多核苷酸构建体,其中每个多核苷酸构建体包含 i可操作地连接至第一启动子的编码核酸修饰酶或其变体的第一多核苷酸序列;和 ii包含DNA靶标或编码RNA靶标的DNA模板的第二多核苷酸序列,其中当所述第二多核苷酸序列包含编码RNA靶标的DNA模板时,所述RNA靶标与所述核酸修饰酶作为单个RNA转录物被所述第一启动子驱动而连续共表达; 并且其中所述多个多核苷酸构建体编码所述核酸修饰酶的不同变体,和或不同的DNA或RNA靶标; b使所述隔室经受允许RNA和蛋白质的体外表达的条件; c使多个所述隔室经受允许通过对DNA或RNA靶标具有修饰活性的核酸修饰酶修饰所述DNARNA靶标的条件,从而产生包含以下中的一个或多个的DNARNA分子群体: i.已被所述核酸修饰酶修饰的多核苷酸构建体和或RNA转录物或其片段; ii.未被所述核酸修饰酶修饰的多核苷酸构建体和或RNA转录物; d收获步骤c中产生的所述DNARNA分子群体,并对其进行单分子测序; e基于测序结果对步骤ci和cii中提到的DNARNA分子进行检测和计数。
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