华中农业大学彭东海获国家专利权
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龙图腾网获悉华中农业大学申请的专利一种青枯雷尔氏菌及高产青枯雷尔氏菌噬菌体的发酵方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118995517B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-22发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411230906.2,技术领域涉及:C12N1/20;该发明授权一种青枯雷尔氏菌及高产青枯雷尔氏菌噬菌体的发酵方法是由彭东海;刘守德;孙明;郑金水;李琪凤设计研发完成,并于2024-09-04向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种青枯雷尔氏菌及高产青枯雷尔氏菌噬菌体的发酵方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种青枯雷尔氏菌及高产青枯雷尔氏菌噬菌体的发酵方法,属于微生物技术领域。本发明通过筛选得到了一株新型青枯雷尔氏菌RalstoniasolanacearumBMB‑Rs0001,其保藏号为CCTCCNO:M20241876,该菌株作为宿主菌可以显著提高青枯雷尔氏菌噬菌体发酵的爆发量。同时,本发明通过对发酵培养基、发酵温度及补料工艺进行改进,最终大幅度提高了青枯雷尔氏菌噬菌体的发酵产量,效价最高可达1.05×1012PFUmL,同时提高了噬菌体的储存稳定性和植物防病效果。本发明方法获得的青枯雷尔氏菌噬菌体在180天内4℃和25℃条件下的储存稳定性显著增强,植物青枯病的防治率也从72.82%提升至90.51%。
本发明授权一种青枯雷尔氏菌及高产青枯雷尔氏菌噬菌体的发酵方法在权利要求书中公布了:1.一种高产青枯雷尔氏菌噬菌体的发酵方法,其特征在于,该方法包括如下步骤: (1)青枯雷尔氏菌宿主菌的发酵培养:将保藏号为CCTCCNO:M20241876的青枯雷尔氏菌RalstoniasolanacearumBMB-Rs0001种子液,接入发酵培养基中进行宿主菌培养,通过调节搅拌转速及进气量控制溶解氧≥40%,第0~4小时控制发酵温度为30~33℃,第4~8小时控制发酵温度为35~38℃,得到宿主菌发酵培养液; (2)青枯雷尔氏菌噬菌体的发酵培养:将噬菌体种子液接种至步骤(1)得到的宿主菌发酵培养液中进行噬菌体培养,通过调节搅拌转速及进气量控制溶解氧为18~22%,第0~4小时培养温度为28~35℃,第4~8小时培养温度为25~30℃;第2~4小时内,分2~4次补加等量的营养培养基,营养培养基的补加总量为发酵体积的5~10%;第6~8小时内,补加无机盐混合液,无机盐混合液的补加量为发酵体积的0.3~0.8%; 步骤(1)中所述发酵培养基的组分包括:果葡糖浆,豆粕,酵母抽提物,玉米浆干粉,肌醇,谷氨酸钠,K2HPO4•3H2O,MgSO4•H2O; 步骤(2)中所述营养培养基的组分包括:蔗糖,谷氨酸钠,肌醇,L-天冬氨酸; 步骤(2)中所述无机盐混合液的组分包括:CaCl2•2H2O,K2HPO4•3H2O,KH2PO4,MnCl2•4H2O; 步骤(2)发酵培养过程中,当活细胞数值≤2.5pFcm时,补加宿主菌菌悬液。
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