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龙图腾网获悉山东丽山生物科技有限公司申请的专利一种嵌合抗原受体NK细胞的制备方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119876273B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-01发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510378427.3，技术领域涉及：C12N15/867；该发明授权一种嵌合抗原受体NK细胞的制备方法及其应用是由张海荣;庞庆霄;苏彦鑫;李金雪;张昊;雒胜韬;刘智超;巩颖颖;张迪设计研发完成，并于2025-03-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种嵌合抗原受体NK细胞的制备方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种嵌合抗原受体NK细胞的制备方法及其应用，涉及免疫技术领域，包括：（1）外周血单个核细胞PBMC的复苏；（2）NK细胞分选；（3）将分选出的NK细胞进行扩增培养；（4）向扩增培养后的NK细胞中加入细胞因子，进行激活培养；所述细胞因子为IL‑2、IL‑15和IL‑21的组合；（5）向激活培养后的NK细胞中加入Polybrene，使用MOI为1~10病毒量的携载CAR分子的慢病毒按照2×105~1×106个mL的细胞密度感染2~24h，感染后换液，继续培养54~72h后，获得嵌合抗原受体NK细胞。本发明利用该优化后的条件进行CAR‑NK细胞的制备，CAR阳性率可至93.87%。

本发明授权一种嵌合抗原受体NK细胞的制备方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种嵌合抗原受体NK细胞的制备方法，其特征是，该方法包括以下步骤： （1）外周血单个核细胞PBMC的复苏：复苏过程中培养基选用CorningKBM581Serum-freeCellMedium； （2）NK细胞分选：所述NK细胞分选方法，该方法包括以下步骤：CD3Microbeads标记PBMC细胞，使用分选柱和磁力架分选出CD3-的细胞；CD56Microbeads标记CD3-PBMC细胞，再次使用分选柱和磁力架，分选出CD3-CD56+的细胞；将CD3-CD56+细胞采用分选培养基培养，培养基中添加设定量的IL-2；分选培养基为CorningKBM581Serum-freeCellMedium； （3）将分选出的NK细胞进行扩增培养：扩增培养时采用的培养基为CorningKBM581Serum-freeCellMedium； （4）向扩增培养后的NK细胞中加入激活细胞因子，进行激活培养；所述细胞因子为IL-2、IL-15和IL-21的组合，IL-2、IL-15和IL-21用量、终浓度分别为500IUmL、10ngmL、10ngmL；激活培养时间为24~48h； （5）向激活培养后的NK细胞中加入Polybrene，使用MOI为10病毒量的携载CAR分子的慢病毒按照8×105个mL的细胞密度感染24h，感染后换液，继续培养72h后，获得嵌合抗原受体NK细胞。

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