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龙图腾网获悉上海立闻生物科技有限公司申请的专利针对少量来自于新鲜样本的肿瘤细胞全转录组测序的方法和试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116042772B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-29发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310097499.1，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权针对少量来自于新鲜样本的肿瘤细胞全转录组测序的方法和试剂盒是由狄宇;闻丹忆设计研发完成，并于2023-02-10向国家知识产权局提交的专利申请。

本针对少量来自于新鲜样本的肿瘤细胞全转录组测序的方法和试剂盒在说明书摘要公布了：本发明公开了针对少量来自于新鲜样本的肿瘤细胞全转录组测序的方法和试剂盒。在8‑9小时内由5000个以上肿瘤细胞裂解后的样本起始，获得cDNA第一链而后进行cDNA二链生成，以接头区段为引物锚定位点进行指数扩增的同时在cDNA两端加上Illumina文库接头，获得符合下游分析要求的高质量cDNA文库。可扩增出10‑20ng高质量全长双链cDNA，95％以上的逆转录与扩增建库成功率，cDNA文库通过转座酶法进行DNA片段化；经测试该裂解液针对不同肿瘤细胞均有较好的裂解效果，能有效排除其他干扰，保证RNA的完整性和浓度，能保证全部肿瘤细胞裂解的同时RNA不降解；同时设计的反转录引物polyT5’段连接有生物素，通过链霉亲和素磁珠特异性的结合，可有效的避免基因组的污染而对后续数据造成的影响。

本发明授权针对少量来自于新鲜样本的肿瘤细胞全转录组测序的方法和试剂盒在权利要求书中公布了：1.针对少量来自于新鲜样本的肿瘤细胞全转录组测序方法，其特征在于，所述方法包含如下步骤： 1自新鲜肿瘤组织样本分离肿瘤细胞，其中，该新鲜肿瘤组织样本来自于肿瘤患者或PDX小鼠模型； 2对分离的肿瘤细胞进行裂解：将分离的肿瘤细胞放入500uL细胞裂解试剂中进行裂解；该细胞裂解试剂组分如下：2-5molL的异硫氰酸胍、体积比为1-25％的水饱和酚、2molL的醋酸钠、0.1-0.5molL的二硫苏糖醇、10-30mmolL的磷酸二氢钾、质量百分比为10-15％的Sarcosyl； 3提取微量总RNA后进一步分离mRNA； 4使用OligodTPrimer-biotin作为3'端逆转录引物，在逆转录酶作用下对mRNA进行逆转录获得全长cDNA第一链； 5在获得的cDNA第一链的3'端不依赖模板，在逆转录酶的Template-switching作用下添加接头引物； 6使用步骤5获得的cDNA为模板，用链霉亲和素磁珠特异性的结合并洗脱，再使用特异性上下游引物以高保真扩增酶作用下进行cDNA二链生成及扩增放大； 7在第二链生成后，加入转座酶接头混合物和打断缓冲液进行片段化、末端修复和连接接头反应，反应结束后用终止反应液5xTS进行终止反应， 使转座酶失活； 8在步骤7所得的产物中加入高保真扩增酶、扩增缓冲液和接头引物进行PCR扩增； 9用磁珠对步骤8扩增产物进行片段分选即可得到可测序的文库； 仅仅5000-1万以内的肿瘤细胞就可以将剩余少量样本满足RNA及转录组测序的要求。

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