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龙图腾网获悉哈尔滨医科大学申请的专利一种通过体外扩增重组质粒在其编码基因上生成短片段串联重复序列的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116218893B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-29发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310295970.8，技术领域涉及：C12N15/70；该发明授权一种通过体外扩增重组质粒在其编码基因上生成短片段串联重复序列的方法是由周春水;林国超;胡子琪;章铭珠;朴晟文;范建坤;柳继超;刘鹏;傅松滨;孙文静;邱晓红;张金伟设计研发完成，并于2023-03-24向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种通过体外扩增重组质粒在其编码基因上生成短片段串联重复序列的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种通过体外扩增重组质粒在其编码基因上生成短片段串联重复序列的方法。本发明方法先以一条半重复单位单链起始引物引导重组质粒的起始PCR扩增，再以一对双拷贝互补引物对引导重组质粒的后续PCR扩增。本发明方法成功地在重组质粒的GPLD1及INPP4B基因上生成了短片段串联重复序列。本发明方法实施简便、无需复杂的克隆操作，阳性克隆比率高。所生成的串联重复序列具有如下特征：1重复单位方向一致、拷贝数可变。2重复单位连接区之间不存在碱基突变，不改变编码基因阅读框。本发明方法适合在重组质粒上的任意编码基因上生成短片段串联重复序列，为阐明串联重复序列与细胞衰老、肿瘤发生及多种神经退行性疾病的发病关系提供了新型研究工具。

本发明授权一种通过体外扩增重组质粒在其编码基因上生成短片段串联重复序列的方法在权利要求书中公布了：1.一种通过体外扩增重组质粒生成抗衰老基因GPLD1磷脂酶活性区31bp短片段串联重复序列的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤： 1构建含有目的编码基因的重组质粒； 将抗衰老基因GPLD1克隆到pcDNA3.1-载体中，得到重组质粒pcDNA3.1--GPLD1，作为体外PCR扩增的起始模板； 2DF-62与DR-62是以GPLD1磷脂酶活性区31bp短片段为模板设计的完全互补引物，分别含有两拷贝31bp短片段重复单位，为了方便后续测序鉴定，将DF-62中GGA突变为AAA，DR-62中的TCC突变为TTT，Short-15是一条起始于该短片段正向序列中部，终止于该短片段正向序列3’末端的长度为15bp的半重复单位单链起始引物，与野生型相比，半重复单位单链起始引物Short-15存在AA两个突变位点，以便于测序结果分析，Seq-F与SR-31配对用于转化克隆的菌液PCR鉴定，Seq-F亦作为Sanger法DNA测序的测序引物，具体引物序列如下所示： Short15：5’-ATAGTCTGGGAATTG-3’ 5’-GCAGATGTCAGCTAAAATAGTCTGGGCCTTGGC DF-62： AGATGTCAGCTAAAATAGTCTGGGCCTTG-3’ 5’-CAAGGCCCAGACTATTTTAGCTGACATCTGCCA DR-62： AGGCCCAGACTATTTTAGCTGACATCTGC-3’ SR-31：5’-CAAGGCCCAGACTATTCCAGCTGACATCTGC-3’ Seq-F：5’-AATTGGTACCATGTCTGCTTTC-3’ 首先，以半重复单位单链起始引物Short-15引导pcDNA3.1--GPLD1重组质粒的起始PCR扩增，然后以起始PCR扩增产物为模板通过双拷贝互补引物对DF-62与DR-62进行后续PCR扩增； 3DpnI酶切PCR混合物，去除起始重组质粒模板； 4转化大肠杆菌TOP10感受态细胞； 5菌落接种培养基，进行扩大培养； 6菌液PCR鉴定以及Sanger法DNA测序。

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