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龙图腾网获悉中国科学院广州生物医药与健康研究院申请的专利一种双核酸酶单细胞谱系示踪系统及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116904511B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-29发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310910983.1，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权一种双核酸酶单细胞谱系示踪系统及其应用是由彭广敦;廖远鑫;陈城设计研发完成，并于2023-07-24向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种双核酸酶单细胞谱系示踪系统及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种双核酸酶单细胞谱系示踪系统及其应用，所述系统包括：双核酸酶表达载体、引导RNA表达载体和靶点表达载体；所述双核酸酶表达载体中含有由TetON启动子控制的第一Cas核酸酶的编码基因和由EF1α启动子控制的第二Cas核酸酶的编码基因，所述第二Cas核酸酶的编码基因后还融合有ERT元件基因。本发明通过使用双核酸酶，通过多西环素Dox和他莫昔芬4‑OHT的添加灵活地控制两套多变的DNA序列Barcode产生系统独立地进行示踪，可用于追踪两个重要的生物学过程，此外，两套Barcode产生系统可同时启动进行记录，可以互相验证谱系记录的准确性。

本发明授权一种双核酸酶单细胞谱系示踪系统及其应用在权利要求书中公布了：1.一种双核酸酶单细胞谱系示踪系统，其特征在于，所述系统包括： 双核酸酶表达载体、引导RNA表达载体和靶点表达载体； 所述双核酸酶表达载体中含有由TetON启动子控制的第一Cas核酸酶的编码基因和由EF1α启动子控制的第二Cas核酸酶的编码基因，所述第一Cas核酸酶和第二Cas核酸酶各自独立地包括Cas9、Cas12a或Cas12b中的任意一种，所述第一Cas核酸酶和第二Cas核酸酶不相同； 所述第一Cas核酸酶的编码基因后还融合有荧光蛋白的编码基因，通过P2A元件连接第一Cas核酸酶的编码基因和荧光蛋白的编码基因，利用Dox诱导TetON启动子，控制第一Cas核酸酶表达； 所述第二Cas核酸酶的编码基因后还融合有ERT元件基因，所述ERT元件基因的核酸序列由SEQIDNO.1所示的序列，所述ERT元件基因通过4-OHT诱导入核进行编辑，第一Cas核酸酶和第二Cas核酸酶识别的PAM序列不同； 所述引导RNA表达载体中含有第一Cas核酸酶的引导RNA的编码基因和第二Cas核酸酶的引导RNA的编码基因； 所述靶点表达载体含有第一Cas核酸酶靶点的DNA序列和第二Cas核酸酶靶点的DNA序列；每个Cas核酸酶的靶点为2个，共4个靶点排列在一起，放置在mCherry的3’UTR区域，靶点后面连接着PolyA序列，靶点在单细胞测序的过程中被捕获到；所述第一Cas核酸酶靶点和第二Cas核酸酶靶点的DNA序列前还整合有随机碱基序列，所述随机碱基序列的长度为8~20bp。

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