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龙图腾网获悉南京医科大学申请的专利一种LTα1β2体外表达生产方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119431549B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-25发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411592263.6，技术领域涉及：C07K14/525；该发明授权一种LTα1β2体外表达生产方法是由李砚川;刘荣和;曾志琴;白子轩设计研发完成，并于2024-11-08向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种LTα1β2体外表达生产方法在说明书摘要公布了：本专利涉及一种成本低、活性高的分泌型LTα1β2细胞因子的体外表达方法。通过去除LTα亚基的信号肽序列，LTβ亚基的跨膜结构域和信号肽序列，亚基之间通过G4S柔性连接子，将1个LTα亚基和2个LTβ亚基连接在一起，并在该蛋白复合物C端加上6×his标签，然后将其构建到pPIC9K质粒上，利用毕赤酵母表达系统表达出分泌型LTα1β2。之后通过镍柱纯化，超滤透析至1×PBS中。后续通过Q‑PCR、WB、流式细胞术实验方法验证其具备较高活性。

本发明授权一种LTα1β2体外表达生产方法在权利要求书中公布了：1.一种细胞因子LTα1β2体外表达生产方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： S1、构建pPIC9K-mLTα1β2-His质粒：删除LTα氨基酸序列的信号肽序列，同时删除LTβ的跨膜结构域，用G4S柔性连接子将一个删除信号肽序列的LTα和两个删除跨膜结构域的LTβ连接，并在C端加上6×His标签，获得mLTα1β2-His片段，将编码mLTα1β2-His片段的核苷酸序列构建到pPIC9K质粒中，获得pPIC9K-mLTα1β2-His质粒，并对密码子进行优化； S2、去除pPIC9K-mLTα1β2-His质粒的内毒素； S3、将S2获得的pPIC9K-mLTα1β2-His质粒通过SalⅠ单酶切线性化，并胶回收； S4、制备毕赤酵母感受态细胞； S5、将S3获得的线性化pPIC9K-mLTα1β2-His质粒电转入毕赤酵母感受态细胞； S6、通过MD培养基和G418固体培养基，筛选出电转阳性，且高拷贝的菌株； S7、提取酵母基因组DNA； S8、QRT-PCR检测并选出拷贝数相对较高的菌株送测序，选择测序结果正确菌株，用作后续表达酵母株； S9、对S8筛选出的菌株进行发酵，收集菌液上清； S10、镍柱纯化，对镍柱洗脱液进行超滤透析，获得LTα1β2S1； 所述LTα氨基酸序列的信号肽序列位于SEQIDNO.1所示LTα氨基酸序列的1-58位，所述LTβ的跨膜结构域位于SEQIDNO.2所示LTβ氨基酸序列的1-152位。

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