潍坊华卓生物科技有限公司;潍坊华英生物科技有限公司鲁爱玲获国家专利权
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龙图腾网获悉潍坊华卓生物科技有限公司;潍坊华英生物科技有限公司申请的专利一种鸭疫里默氏杆菌复合疫苗及卵黄抗体的制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120022354B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510519756.5,技术领域涉及:A61K39/02;该发明授权一种鸭疫里默氏杆菌复合疫苗及卵黄抗体的制备方法是由鲁爱玲;曹阳;辛瑞祥;王辉;王宏华;张勇;王义敏;赵光勋;孙伟设计研发完成,并于2025-04-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种鸭疫里默氏杆菌复合疫苗及卵黄抗体的制备方法在说明书摘要公布了:本申请公开了一种鸭疫里默氏杆菌复合疫苗及卵黄抗体的制备方法,其属于生物技术领域,将鸭疫里默氏杆菌荚膜多糖与重组PVAX1‑OmpA质粒混合制备鸭疫里默氏杆菌复合疫苗;复合疫苗免疫蛋鸡后,三免后7日可达到收蛋要求,其在卵黄抗体产生时间、抗体产生高度及抗体持续期方面,均显著优于全菌体灭活疫苗;且三免后2个月进行检测,卵黄抗体效价仍符合要求,卵黄抗体对鸭疫里默氏杆菌感染的雏鸭具有良好的临床保护效果,可用于鸭疫里默氏杆菌的预防与治疗;本方法还可以降低鸭疫里默氏杆菌卵黄抗体的制备成本,可减少蛋鸡的免疫应激,极具推广与应用价值。
本发明授权一种鸭疫里默氏杆菌复合疫苗及卵黄抗体的制备方法在权利要求书中公布了:1.一种鸭疫里默氏杆菌复合疫苗的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: (一)、将荚膜多糖溶液和重组PVAX1-OmpA质粒按比例混合,灭活后制得半成品; 所述荚膜多糖溶液的制备方法为:将鸭疫里默氏杆菌发酵培养,制得发酵液,将所述发酵液离心取上清,加入十六烷基三甲基溴化铵溶液后离心弃上清,沉淀用氯化钠溶液重悬,加入乙醇后离心弃上清,溶解沉淀,得到荚膜多糖溶液;加入所述十六烷基三甲基溴化铵溶液后的鸭疫里默氏杆菌发酵液终浓度为5mM;所述氯化钠溶液的浓度为0.4M,所述乙醇的浓度为95%; 所述重组PVAX1-OmpA质粒的制备方法为: (1)、重组PVAX1-OmpA质粒的载体构建:全基因合成鸭疫里默氏杆菌的外膜蛋白OmpA基因,将所述外膜蛋白OmpA基因与真核表达载体PVAX1通过酶切连接构建重组PVAX1-OmpA质粒,并转入大肠杆菌DH5α; (2)、重组PVAX1-OmpA质粒大量制备:将所述大肠杆菌DH5α发酵培养后,离心收集菌体,依次加入盐酸缓冲液、氢氧化钠溶液和醋酸溶液,后处理得到纯化重组PVAX1-OmpA质粒溶液;去除所述纯化重组PVAX1-OmpA质粒溶液的细菌内毒素,得到大量制备的重组PVAX1-OmpA质粒; 步骤(2)中,所述菌体与盐酸缓冲液的比例为1g:5ml,所述盐酸缓冲液、氢氧化钠溶液和醋酸溶液的体积比为1:2:1.5; 所述荚膜多糖溶液中荚膜多糖的终浓度为0.1-0.6mgml,重组PVAX1-OmpA质粒的终浓度为10-100µgml; (二)、将注射用白油、硬脂酸铝混合,加热后加入司本80,升温混合,制得油相;将吐温80和所述半成品混合,制得水相;将所述油相和水相混合进行乳化,制得鸭疫里默氏杆菌复合疫苗。
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