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龙图腾网获悉中国医学科学院医学实验动物研究所申请的专利用于建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116042634B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-22发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211313920.X，技术领域涉及：C12N15/12；该发明授权用于建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠的方法是由马元武;齐晓龙;张旭;董伟;孔维宁;张连峰设计研发完成，并于2022-10-25向国家知识产权局提交的专利申请。

本用于建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠的方法在说明书摘要公布了：本发明提供一种用于建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠的方法。利用DdCBE碱基编辑工具，使大鼠mtDNA编码基因密码子TGA编码氨基酸W或CAA编码氨基酸Q转变为终止密码子TAA，导致翻译提前终止。通过CRISPRCas9技术将Cre依赖性表达的LSL‑DdCBE元件敲入大鼠Rosa26位点，建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠。通过与Cre工具大鼠杂交，激活DdCBE的表达和编辑，从而实现组织或细胞特异性mtDNA编码基因的敲除。本发明针对mtDNA编码基因敲除的技术限制，通过DdCBE工具和Cre‑loxP系统的联合应用，开发一种能够在大鼠中实现条件性敲除mtDNA编码基因的方法。

本发明授权用于建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠的方法在权利要求书中公布了：1.一种大鼠mtDNA编码基因敲除方法，包括： 将L-DdCBE和R-DdCBE序列通过P2A序列连接，构建L-DdCBE-P2A-R-DdCBE元件； 克隆L-DdCBE-P2A-R-DdCBE元件到Rosa26-HR-CAG-LSL载体中，构建Rosa26-HR-CAG-LSL-DdCBE表达载体； 利用CRISPRCas9技术将CAG-LSL-DdCBE元件插入大鼠Rosa26位点，构建LSL-DdCBEKI大鼠； 选择大鼠mtDNA靠近基因编码框5’端的密码子TGA中碱基G或密码子CAA中碱基C作为目标靶点； 在目标突变碱基GC位置上下游分别选定一个TALE识别靶序列，两个TALE识别靶序列中间的间隔序列为7-18bp，且不含除目标突变碱基GC之外的碱基GC，其中两个TALE识别靶序列与间隔序列一起限定目标突变序列； 筛选能够准确靶向目标位点，并使其发生高效C•G-to-T•A转变的DdCBE组合，从而在大鼠mtDNA编码基因中引入终止密码子TAA，使得蛋白翻译提前终止, 其中实现大鼠mtDNA编码基因敲除的目标位点和DdCBE组合分别如下： 目标位点为：Nd1G2996，其所选定的两个TALE识别靶序列分别为：左侧识别靶序列为TACACTAGCTCTAA；右侧识别靶序列为GTTATGGAGTGGGGGAA； 其中所筛选的DdCBE组合为：如序列表中SEQIDNO.25所示的RatNd1G2996LeftTALE-G1333C和如序列表中SEQIDNO.26所示的RatNd1G2996RightTALE-G1333N。

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