江苏第二师范学院吕蓓获国家专利权
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龙图腾网获悉江苏第二师范学院申请的专利一种基于CRISPR-Cas12a的ATP可视化检测系统及检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118703599B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-22发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410824051.X,技术领域涉及:C12Q1/6844;该发明授权一种基于CRISPR-Cas12a的ATP可视化检测系统及检测方法是由吕蓓;李大为;陈阳设计研发完成,并于2024-06-25向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于CRISPR-Cas12a的ATP可视化检测系统及检测方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的ATP可视化检测系统及检测方法,包括识别探针AP、发卡DNAH1和H2、LbCas12a蛋白、crRNA、transducerDNA、SSG4。该方法利用探针AP识别ATP,触发无酶等温扩增反应,进而激活LbCas12a‑crRNA的核酸酶活性,切割transducerDNA。由于显色反应中的G‑四链体核酸SSG4过氧化物酶活性受到transducerDNA的调控,ATP诱发的扩增及transducerDNA切割反应可使得SSG4过氧化物酶活性保持,进而催化底物氧化反应使溶液呈显著的蓝绿色。该方法避免了G‑四链体直接作为LbCas12a蛋白‑crRNA复合体切割底物时的核酸酶抗性问题。利用该方法检测ATP时,方法简单,核酸无需化学修饰,检测灵敏度高,可实现基于颜色变化的现场即时检测,在医学检测及生物学研究中具有广泛的应用前景。
本发明授权一种基于CRISPR-Cas12a的ATP可视化检测系统及检测方法在权利要求书中公布了:1.一种基于CRISPR-Cas12a的ATP可视化检测系统,其特征在于,包括:识别探针AP、发卡DNAH1、发卡DNAH2、LbCas12a蛋白、crRNA、transducerDNA和G-四链体核酸SSG4; 其中,所述识别探针AP由核酸序列Aptamer与核酸序列LC-8经退火后得到;发卡DNAH1和发卡DNAH2为链置换等温扩增反应元件;transducerDNA为单链DNA,是LbCas12a蛋白的反式剪切底物; 所述G-四链体核酸SSG4在与血红素结合后产生过氧化物酶活性,能够催化底物ABTS氧化成为蓝绿色产物,从而实现比色信号输出; 所述transducerDNA为能够通过结合、并改变G-四链体核酸SSG4的结构,从而调节G-四链体核酸SSG4的过氧化物酶活性; 所述Aptamer序列如SEQIDNo.1所示;LC-8序列如SEQIDNo.2所示;发卡DNAH1序列如SEQIDNo.3所示;发卡DNAH2序列如SEQIDNo.4所示;crRNA序列如SEQIDNo.5所示;transducerDNA序列如SEQIDNo.6所示;G-四链体核酸SSG4序列如SEQIDNo.7所示; 所述识别探针AP能够特异性识别ATP,并诱发后续扩增反应;发卡DNAH1和发卡DNAH2包含CRISPR-Cas12a系统的识别序列和PAM位点。
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