江南大学刘龙获国家专利权
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龙图腾网获悉江南大学申请的专利一种枯草芽孢杆菌中乳糖或其类似物生物传感器筛选系统的构建及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118440970B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-18发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410607555.6,技术领域涉及:C12N15/75;该发明授权一种枯草芽孢杆菌中乳糖或其类似物生物传感器筛选系统的构建及应用是由刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;徐显皓;李江华;刘延峰;张权威设计研发完成,并于2024-05-16向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种枯草芽孢杆菌中乳糖或其类似物生物传感器筛选系统的构建及应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种枯草芽孢杆菌中乳糖或其类似物生物传感器筛选系统的构建及应用。本发明设计了一种基于乳糖操纵子的适用于枯草芽孢杆菌的“双筛选”生物传感器阻遏蛋白筛选基因回路:通过负筛选致死回路实现阻遏蛋白DNA结合活性筛选;通过正筛选荧光信号实现变构激活活性筛选;最终获得目标乳糖类似物识别活性的生物传感器。使用该筛选平台可获得响应乳糖、2’‑岩藻糖基乳糖、3‑岩藻糖基乳糖等物质的新型生物传感器,且经验证,本发明根据筛选结果构建的生物传感器具有较高的检测灵敏度和特异性。
本发明授权一种枯草芽孢杆菌中乳糖或其类似物生物传感器筛选系统的构建及应用在权利要求书中公布了:1.一种乳糖或其类似物生物传感器的筛选方法,其特征在于:包括以下步骤: S1、构建DNA结合转录抑制因子LacI突变体库; S2、构建含有不同DNA结合转录抑制因子LacI突变体基因表达框和筛选系统基因回路表达框的重组细胞库;所述筛选系统基因回路表达框中含有诱导型启动子、报告基因和自杀基因; S3、培养S2得到的重组细胞库使DNA结合转录抑制因子LacI突变体和筛选系统基因回路表达框中的基因表达,然后将该重组细胞库转移至第一培养基中培养,筛选出存活细胞;所述第一培养基中含有无细胞毒性的前体药物,所述自杀基因编码的蛋白可将无细胞毒性的前体药物转化成有细胞毒性的活性药物; S4、将S3中的存活细胞转移至第二培养基中培养,根据报告基因信号强度筛选细胞,得到目标生物传感器;所述第二培养基中含有乳糖或其类似物; 其中,所述自杀基因选自胸苷激酶基因或胞嘧啶脱氨酶基因,所述无细胞毒性的前体药物选自5-氟胞嘧啶或5-氟-2'-脱氧尿苷, 由诱导型启动子控制的报告基因通过柔性linker与自杀基因连接,所述柔性linker的氨基酸序列为SEQIDNO.5、SEQIDNO.6、SEQIDNO.7所示任一。
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