重庆市畜牧科学院;生猪技术创新中心(重庆)朱买勋获国家专利权
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龙图腾网获悉重庆市畜牧科学院;生猪技术创新中心(重庆)申请的专利一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116754659B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-15发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310399434.2,技术领域涉及:G01N30/02;该发明授权一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法是由朱买勋;唐红梅;张阳设计研发完成,并于2023-04-14向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法在说明书摘要公布了:一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法,所述中药复方是甘草泻心汤,是先建立甘草泻心汤指纹图谱,再进行抗炎抑菌活性试验,将抑菌试验结果进行PCA分析获得抑菌综合药效指标,通过OPLS分析建立抗炎、抑菌的谱‑效关系数学模型,计算GRA关联度,获取与抗炎、抑菌有关的药物成分。本发明通过建立甘草泻心汤中全方指纹图谱,进一步分别建立其水溶性部位UPLC指纹图谱和脂溶性部位GC‑MS指纹图谱,将全方、水溶性成分和脂溶性成分分别进行抗炎、抑菌试验,结合图谱分析得到每一个成分与抗炎、抑菌相关的数学模型,快速、有效的检测出每一批甘草泻心汤关于抗炎抑菌的效果优劣,对其质量形成精准把控。
本发明授权一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法在权利要求书中公布了:1.一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法,其特征在于:所述中药复方是甘草泻心汤,是先建立甘草泻心汤指纹图谱,再进行抗炎抑菌活性试验,将抑菌试验结果进行主成分分析获得抑菌综合药效指标、将抗炎药效结果和抑菌药效结果与其指纹图谱进行谱效关系分析,通过正交投影偏最小二乘法分析建立抗炎、抑菌的谱-效关系数学模型,通过关联度分析计算灰色关联度,获取与抗炎、抑菌有关的药物组分,所述建立甘草泻心汤指纹图谱按照如下步骤: (1)制备供试品溶液 按单次剂量为甘草20g,黄芩15g,干姜15g,大枣12g,半夏13g,黄连5g,即单次剂量共80g称量,全方组方称取16批次,利用半仿生提取法提取样品,提取条件:第一煎水pH=4.0、第二煎水pH=7.0、第三煎水pH=8.0、煎煮时间共2h,其中第一次煎煮1.0h,第二次煎煮0.5h,第三次煎煮0.5h,提取温度95℃、液料比1:10,回流提取;以上PH水用0.1mol·L-1的HCl和的0.1mol·L-1NaOH调节;合并3次提取液,55℃减压浓缩至1g·mL-1,分别作为样品母液,在4℃下保存备用,此时获得样品母液为全方样品; 按优化后的萃取剂比例和定容剂比例,以1:1作为溶剂与提取液萃取比例,1:2作为定容剂比例,取样品母液20mL,乙酸乙酯溶剂20mL,通过萃取瓶振摇5min,静置10min,取上层溶液作为脂溶性部位层,下层溶液作为水溶性部位层,萃取3次,分别合并3次萃取液,脂溶性部位于45℃旋转蒸发仪蒸干,水溶性部位于55℃旋转蒸发仪蒸干,再分别用乙酸乙酯和体积分数为50%甲醇溶液定容至20mL,水溶性和脂溶性样品溶液质量浓度为0.5g·mL-1,4℃下保存备用; (2)对照品溶液的制备: 称取适量姜酮、盐酸黄连碱、甘草素、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、6-姜辣素、甘草酸铵、黄芩苷、甘草苷、汉黄芩素11个对照作为全方样品混合对照品,以甲醇溶解至浓度为1.0mg·mL-1,4℃冰箱保存作为对照品溶液; 相同的方法称取适量的甘草苷,黄芩苷,汉黄芩苷,盐酸黄连碱,甘草素,甘草酸铵,盐酸小檗碱配置出水溶性部位的对照品溶液; (3)色谱条件 全方样品和水溶性部位样品对应的UPLC色谱条件:色谱柱Shim-packScepterC18-2003μm,4.6×250mm,检测波长277nm,流速0.3mL·min-1,进样量3μL,柱温15℃; 梯度洗脱:A为体积分数为0.4%的甲酸水溶液,B为乙腈,0~5min,流动相B的体积百分含量从2%升至6%;5~10min,流动相B的体积百分含量从6%升至8%;10~15min,流动相B的体积百分含量从8%升至15%;15~20min,流动相B的体积百分含量从15%升至20%;20~30min,流动相B的体积百分含量从20%升至23%;30~40min,流动相B的体积百分含量从23%升至32%;40~60min,流动相B的体积百分含量从32%升至35%;60~80min,流动相B的体积百分含量从35%升至50%;80~85min,流动相B的体积百分含量从50%升至80%;85~90min,流动相B的体积百分含量从80%升至98%;90~95min,流动相B的体积百分含量从98%降至60%;95~100min,流动相B的体积百分含量从60%降至35%;100~105min,流动相B的体积百分含量从35%降至2%; 脂溶性部位样品的GC-MS色谱条件:进样口温度260℃,接口温度300℃,不分流模式,载气为氦气,流速为0.8mL.min-1,压力70kPa,进样量0.5μl,升温程序:初始温度50℃,保持20min,以3℃·min-1升至150℃,保持5min,再以5℃·min-1升至250℃,保持15min,电离方式EI,全扫描模式,mz=12~600,离子源温度230℃,四级杆温度150℃。
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