中国科学院微生物研究所王硕获国家专利权
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龙图腾网获悉中国科学院微生物研究所申请的专利免疫类器官的培养方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118222483B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-11发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410360498.6,技术领域涉及:C12N5/071;该发明授权免疫类器官的培养方法及应用是由王硕;赵敏;郑梦利设计研发完成,并于2024-03-27向国家知识产权局提交的专利申请。
本免疫类器官的培养方法及应用在说明书摘要公布了:本发明提供一种免疫类器官的培养方法及应用。本发明通过分离肺脏浸润淋巴结进行免疫类器官的培养,对流感病毒产生的黏膜免疫应答水平进行评估。通过向细胞培养基添加BAFF、IL‑2等成分,并采用气液法对肺脏浸润淋巴结来源的免疫细胞进行三维重构,形成具有类似淋巴结构的免疫类器官。该免疫类器官能够更加真实地反应出肺部局部免疫应答水平,较好地保留多种免疫细胞。同时活化T细胞,增强其对B细胞的辅助作用;大大缩短了B细胞分化为浆细胞及成熟的时间,提高了对病毒抗原免疫原性进行检测评估的效率。
本发明授权免疫类器官的培养方法及应用在权利要求书中公布了:1.免疫类器官的培养方法,其特征在于,包括以下步骤: 1取组织浸润淋巴结,剪成小块,放入100μm滤网中进行研磨,并用完全培养基冲洗,至研磨彻底; 2将经过滤网的细胞悬液加入Ficoll上方,400g-600g离心30min后,收集白膜层细胞;配制完全培养基plus,即向完全培养基中添加2mMGlutaMAX,0.1mM非必需氨基酸,1mM丙酮酸钠,100Uml青链霉素,100μgmlNormocin和10μgml胰岛素,5.5μgml转铁蛋白,6.7ngml硒酸钠,2μgml氨基乙醇,即为完全培养基plus;用完全培养基plus洗涤细胞后,计数并重悬至1×107-2×107个细胞毫升,得到细胞悬液; 其中,所述完全培养基为RPMI1640+10%FBS; 所述非必需氨基酸由甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸和丝氨酸组成,各成分含量均为0.1mM; 3配制用于体外培养免疫类器官的培养基,将膜孔径为0.4μm的小室放入细胞培养板中,每孔加0.5ml配制好的用于体外培养免疫类器官的培养基,并在小室中加入100μl步骤2的细胞悬液; 4向小室中加入抗原或减毒疫苗,放入培养箱进行培养; 5每隔2-3天进行补液,即补充所述用于体外培养免疫类器官的培养基,使其维持在孔板的培养液界面之上; 6每7天进行换液,使用所述用于体外培养免疫类器官的培养基进行换液,取上清进行抗体水平的检测,共培养28-35天; 所述用于体外培养免疫类器官的培养基是在完全培养基中添加2mMGlutaMAX,0.1mM非必需氨基酸,1mM丙酮酸钠,100Uml青链霉素,100μgmlNormocin和10μgml胰岛素,5.5μgml转铁蛋白,6.7ngml硒酸钠,2μgml氨基乙醇,以及1μgmlBAFF和20UmlIL-2; 其中,所述完全培养基为RPMI1640+10%FBS; 所述非必需氨基酸由甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸和丝氨酸组成,各成分含量均为0.1mM; BAFF为B细胞激活因子; 所述组织浸润淋巴结为肺脏浸润淋巴结。
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