之江实验室;南京师范大学吴丽娜获国家专利权
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龙图腾网获悉之江实验室;南京师范大学申请的专利基于CIRSPR-Cas体系检测铅离子的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116106298B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210933674.1,技术领域涉及:G01N21/78;该发明授权基于CIRSPR-Cas体系检测铅离子的方法是由吴丽娜;徐诗琦;郭玲;吴成媛;魏金慧设计研发完成,并于2022-08-04向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于CIRSPR-Cas体系检测铅离子的方法在说明书摘要公布了:本发明涉及比色分析检测技术,公开了一种基于CIRSPR‑Cas体系检测铅离子的方法。该方法包括以下步骤:将含有靶DNA片段的特异酶与可能含有铅离子的待测样品混合形成待测混合物I,将所述待测混合物I与CRISPR‑Cas12a体系溶液进行混合反应后得到待测混合物II;将所述待测混合物II与含有单链DNA的生物传感器进行混合反应后得到待测反应液,将所述待测反应液经固液分离得到的沉淀与显色剂混合进行显色反应得到显色反应液,对所述显色反应液进行比色分析或者吸光值检测分析;其中,所述靶DNA能够激活所述CRISPR‑Cas12a体系中的Cas12a蛋白。该方法对重金属的检测灵敏度高,且能够有效缩短检测时间,实用性强。
本发明授权基于CIRSPR-Cas体系检测铅离子的方法在权利要求书中公布了:1.一种基于CIRSPR-Cas体系检测铅离子的方法,其特征在于,包括以下步骤: 1将含有靶DNA片段的特异酶与可能含有铅离子的待测样品混合形成待测混合物I,将所述待测混合物I与CRISPR-Cas12a体系溶液进行混合反应I得到待测混合物II; 2将所述待测混合物II与含有单链DNA的生物传感器进行混合反应II得到待测反应液,将所述待测反应液经固液分离得到的沉淀与显色剂混合进行显色反应得到显色反应液,对所述显色反应液进行比色分析或者吸光值检测分析,判断所述待测样品中是否含有铅离子; 其中,所述靶DNA能够激活所述CRISPR-Cas12a体系中的Cas12a蛋白; 步骤1中所述特异酶为GR-5DNA酶,所述GR-5DNA酶的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示,所述靶DNA的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示;所述CRISPR-Cas12a体系溶液含有crRNA、Cas12a蛋白、核糖核酸酶抑制剂和缓冲剂,所述crRNA的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示; 步骤2中所述生物传感器包括表面修饰有链霉亲和素的磁珠、修饰有生物素的单链DNA和氨基化的二氧化锰纳米棒,所述单链DNA通过所述生物素与所述磁珠上的链霉亲和素连接,所述单链DNA远离所述磁珠的一端与所述氨基化的二氧化锰纳米棒连接;所述单链DNA的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示;所述显色剂为3,3',5,5'-四甲基联苯胺。
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