中国科学院大连化学物理研究所张丽华获国家专利权
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龙图腾网获悉中国科学院大连化学物理研究所申请的专利一种富集细胞表面介导tau蛋白扩散受体的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116143865B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-04发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202111393526.7,技术领域涉及:C07K1/16;该发明授权一种富集细胞表面介导tau蛋白扩散受体的方法是由张丽华;潘慧;张堃;赵宝锋;梁振;杨开广;张玉奎设计研发完成,并于2021-11-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种富集细胞表面介导tau蛋白扩散受体的方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种通过在微管相关蛋白tau上修饰biotin生物素从而实现发现介导tau内吞受体的新方法。本发明发现,tau蛋白能被小鼠海马神经元细胞HT22摄取。通过StreptAvidin‑Biotin富集后银染,观察到差异条带。进一步通过质谱鉴定到差异蛋白候选。本发明的研究成果为发现介导tau扩散的受体蛋白提供了有效的方法。
本发明授权一种富集细胞表面介导tau蛋白扩散受体的方法在权利要求书中公布了:1.一种富集细胞表面介导tau蛋白扩散受体的方法,其特征在于: 1)在tau蛋白上修饰biotin,获得tau-biotin; 2)将tau-biotin与细胞共孵育,收集细胞进行细胞裂解,然后于裂解的细胞液中加入10-100μlStreptavidinAgarose将目标蛋白富集出来; 所述方法的具体过程为, 步骤1)取50-200μgtau蛋白溶解于100μl水中; 配制终浓度为5-20mmolL-1EZ-Link™Sulfo-NHS-LC-biotin水溶液; 取1-5μlEZ-Link™Sulfo-NHS-LC-biotin水溶液加入到溶解的tau蛋白中,混匀,4-25℃反应1-4小时,加入1-10μl浓度为1molL-1的碳酸氢铵中和未反应的EZ-Link™Sulfo-NHS-LC-biotin,得到tau-biotin溶液; 步骤2)于含有细胞的培养液中加入终浓度50-200nmolL-1tau-biotin孵育细胞1-4小时,孵育结束后,弃上清,用PBS洗细胞; 于1~5x107个细胞中加入1ml细胞裂解液;裂解后,12000-15000g,4℃,20-40分钟离心;离心收集上清,于上清液中加入10-100μlStreptavidinAgarose即链霉亲和素琼脂糖纯化树脂室温条件下富集,富集时间2-6小时;富集结束后,离心弃上清;加入细胞裂解液洗StreptavidinAgarose;洗完后,向StreptavidinAgarose中加入20-60μl1xloadingbuffer,95℃,5-10分钟,使蛋白变性脱落;离心收集蛋白。
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