上海市农业科学院;北京林业大学冯娜获国家专利权
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龙图腾网获悉上海市农业科学院;北京林业大学申请的专利一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116429929B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-04发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310296493.7,技术领域涉及:G01N30/02;该发明授权一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法是由冯娜;张劲松;戴玉成;汪旵;滕李铭;司静;颜梦秋;周帅;唐庆九;王金艳;谭贻设计研发完成,并于2023-03-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法,该方法包括如下步骤:1紫芝菌丝体的预处理步骤;2超高效液相色谱检测步骤;3化合物质谱信息获得步骤;4超高效液相色谱‑三重四级杆质谱联用分析方法建立步骤;5数据分析步骤。本发明提供的同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法,可以对紫芝发酵菌丝体中代谢产生的12个三萜化合物同时进行准确的定性定量分析,灵敏度高,特异性强,从而为紫芝菌丝体三萜化合物的研究和相关产品开发提供快速精确的检测分析方法。
本发明授权一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法在权利要求书中公布了:1.一种同时检测紫芝菌丝体中12种三萜化合物的方法,其特征在于该方法包括如下步骤: 1紫芝菌丝体的预处理步骤:将紫芝菌丝体加入甲醇进行超声提取或者60℃加热提取,取上清液,过滤,得到的滤液逐级稀释后即为待测样品溶液;配制12种三萜化合物的混合对照品溶液; 2超高效液相色谱检测步骤:对待测样品溶液和12种三萜化合物混合对照品溶液进行超高效液相色谱分离; 3化合物质谱信息获得步骤:通过质谱优化软件AgilentOptimizer,对12种三萜化合物进行母离子扫描、子离子对的检出以及最佳碰撞能的寻找; 4超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用分析方法建立步骤:在数据采集软件AgilentMassHunterDataAcquisition中,在超高效液相色谱分析条件和三重四级杆质谱检测条件下,导入保留时间,母离子、子离子对以及碰撞能数据,建立12种三萜化合物的动态多反应监测DMRM分析测定方法;同时,对不同浓度的混合对照品溶液和样品溶液进行上样测定; 5数据分析步骤,运用定量分析软件AgilentMassHunterQuantitativeAnalysis,创建12种三萜化合物的标准曲线,对所建方法进行方法学验证,并对紫芝菌丝体样品溶液进行定量分析; 其中所述的12种三萜化合物为: 22S,24E-3,7-dioxo-15α,22β-dihydroxylanosta-8,24-dien-26-oicacid,化合物1; 3β,15α,22β-trihydroxy-lanosta-7,911,24-trien-26-oicacid,化合物2; 22S,24E-3,7,11-trioxo-15α-hydroxy-22β-acetoxylanosta-8,24-dien-26-oicacid,化合物3; 22S,24E-3-oxo-15α,22β-dihydroxylanosta-7,911,24-trien-26-oicacid,化合物4; 22S,24E-3-oxo-15α-hydroxy-22β-acetoxylanosta-7,911,24-trien-26-oicacid,化合物5; 22S,24E-3β-acetoxy-15α,22β-dihydroxylanosta-7,911,24-trien-26-oicacid,化合物6; 22S,24E-3-oxo-15α,22β-diacetoxylanosta-7,911,24-trien-26-oicacid,化合物7; 22S,24E-22β-hydroxy-3β,15α-diacetoxylanosta-7,911,24-trien-26-oicacid,化合物8; 22S,24E-15α-hydroxy-3β,22β-diacetoxylanosta-7,911,24-trien-26-oicacid,化合物9; lanosta-7,911,24-trien-3β,15α,22β-triacetoxy-26-oicacid,化合物10; 24Z-3β,15α-diacetoxylanosta-7,911,24-trien-26-oicacid,化合物11; 22S,24E-3β,22β-diacetoxylanosta-7,911,24-trien-26-oicacid,化合物12; 其中步骤2和4中超高效液相色谱分离的色谱条件为:选用AgilentZORBAXEclipsePlusC18色谱柱,1.8μm,2.1×150mm,检测波长:240nm;柱温:35℃;室温:20℃;上样量为2μL;流速:0.4mLmin;压力:800bar;流动相A:0.01%冰醋酸;流动相B:乙腈;洗脱程序:0min,55%A,45%B;5min,55%A,45%B;10min,25%A,75%B;15min,15%A,85%B;17min,0%A,100%B;20min,0%A,100%B。
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