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云南农业大学李富生获国家专利权

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龙图腾网获悉云南农业大学申请的专利一种农杆菌介导的甘蔗复合体蔗茅的遗传转化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118147220B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-04发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410324599.8,技术领域涉及:C12N15/84;该发明授权一种农杆菌介导的甘蔗复合体蔗茅的遗传转化方法是由李富生;钱禛锋;饶席兵;吴华英;何丽莲;谷书杰;张蓉琼;陈疏影;王先宏;刘鲁峰设计研发完成,并于2024-03-21向国家知识产权局提交的专利申请。

一种农杆菌介导的甘蔗复合体蔗茅的遗传转化方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种农杆菌介导的甘蔗复合体蔗茅的遗传转化方法,属于植物组织培养和遗传转化技术领域,本发明通过农杆菌介导转化,开发了甘蔗复合体二倍体蔗茅的遗传转化体系,通过优化蔗茅的愈伤组织诱导培养基,提高蔗茅愈伤组织的胚性;通过真空渗透,强化蔗茅愈伤组织的浸染力度;通过愈伤组织的恢复培养和继代筛选培养,增加了转化效率;使用本发明的遗传转化方法,转化70‑90块蔗茅胚性愈伤组织,能得到10‑14个转基因株系,转化效率高达到14.21%。本发明首次构建了蔗茅的遗传转化体系,为进一步将蔗茅开发成为甘蔗复合体的模式植物奠定了基础,为开展甘蔗复合体功能基因研究提供了技术支撑。

本发明授权一种农杆菌介导的甘蔗复合体蔗茅的遗传转化方法在权利要求书中公布了:1.一种农杆菌介导的甘蔗复合体蔗茅的遗传转化方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤1,将蔗茅的幼嫩心叶接种至愈伤组织诱导培养基CIM中培养,将培养获得的愈伤组织再次转移到CIM培养基中,进行继代培养,获得胚性愈伤组织; 步骤2,选择携带抗除草剂Bar基因标记或者抗潮霉素hpt基因标记的植物表达载体,将所述植物表达载体转化农杆菌感受态细胞,筛选携带所述植物表达载体的阳性菌落,即为工程菌; 步骤3,将工程菌接种于YEP培养基,扩大培养、离心收集菌体,并使用重悬液RS悬浮,制备含有工程菌的浸染液; 步骤4,将步骤1获得的胚性愈伤组织转移至含有工程菌的浸染液中培养,之后进行真空抽滤、震荡培养,将培养后的愈伤组织转移至愈伤组织共培养基CCM中,进行共培养;共培养结束后,将愈伤组织转移至恢复培养基CRM中,进行恢复培养; 步骤5,将恢复培养结束后的愈伤组织转移到愈伤组织继代筛选培养基CRSM中进行继代筛选培养,筛选获得抗性愈伤组织;将抗性愈伤组织转移到愈伤组织分化筛选培养基CDSM上进行分化筛选培养,得到抗性芽; 步骤6,抗性芽经生根、PCR鉴定后,得到阳性转基因苗; 其中,所述愈伤组织诱导培养基CIM由以下浓度组分组成:MS+蔗糖30gL+甘蔗维生素1mL+新鲜椰子水50mL+水解酪蛋白0.5gL+柠檬酸0.15gL+半胱氨酸0.05gL+肌醇0.1gL+2,4-D3mgL+硝酸银2mgL+植物凝胶3gL; 所述YEP培养基由以下浓度组分组成:酵母粉10gL+牛肉膏10gL+NaCl5gL+卡那霉素50mgL+利福平50mgL; 所述重悬液RS由以下浓度组分组成:12MS+葡萄糖2gL+麦芽糖2gL+乙酰丁香酮100µM; 所述愈伤组织共培养基CCM由以下浓度组分组成:MS+蔗糖30gL+甘蔗维生素1mL+新鲜椰子水50mL+水解酪蛋白0.5gL+柠檬酸0.15gL+半胱氨酸0.05gL+肌醇0.1gL+2,4-D3mgL+硝酸银2mgL+乙酰丁香酮100µM+植物凝胶3gL; 所述恢复培养基CRM培养基由以下浓度组分组成:MS+蔗糖30gL+甘蔗维生素1mL+新鲜椰子水50mL+水解酪蛋白0.5gL+柠檬酸0.15gL+半胱氨酸0.05gL+肌醇0.1gL+2,4-D3mgL+硝酸银2mgL+植物凝胶3gL+头孢霉素400mgL; 所述愈伤组织继代筛选培养基CRSM培养基由以下浓度组分组成:MS+蔗糖30gL+甘蔗维生素1mL+新鲜椰子水50mL+水解酪蛋白0.5gL+柠檬酸0.15gL+半胱氨酸0.05gL+肌醇0.1gL+2,4-D3mgL+硝酸银2mgL+植物凝胶3gL+头孢霉素400mgL+除草剂basta2mgL或潮霉素30mgL; 所述愈伤组织分化筛选培养基CDSM由以下浓度组分组成:MS+蔗糖30gL+甘蔗维生素1mL+新鲜椰子水50mL+水解酪蛋白0.5gL+柠檬酸0.15gL+半胱氨酸0.05gL+肌醇0.1gL+2,4-D3mgL+硝酸银2mgL+植物凝胶3gL+头孢霉素400mgL+除草剂basta2mgL或潮霉素30mgL; 所述甘蔗维生素为:1g维生素B1、0.5g维生素B6、0.5g烟酸、2g甘氨酸、50g精氨酸和1L水。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人云南农业大学,其通讯地址为:650201 云南省昆明市盘龙区黑龙潭黑金路95号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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