大连理工大学;深圳近邻生物科技有限公司林佳奇获国家专利权
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龙图腾网获悉大连理工大学;深圳近邻生物科技有限公司申请的专利一种利用RNA结合蛋白增强mRNA蛋白表达的序列优化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117448332B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-24发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311418703.1,技术领域涉及:C12N15/113;该发明授权一种利用RNA结合蛋白增强mRNA蛋白表达的序列优化方法是由林佳奇;马兴欢设计研发完成,并于2023-10-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种利用RNA结合蛋白增强mRNA蛋白表达的序列优化方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种利用RNA结合蛋白增强mRNA蛋白表达的序列优化方法,该方法利用在各个细胞中广泛表达的RNA结合蛋白HuR,通过在mRNA分子3’UTR内插入HuR蛋白特异性识别的序列,HuR蛋白特异性结合mRNA分子,增强mRNA稳定性,提高蛋白质的表达。本发明采用上述的一种利用RNA结合蛋白增强mRNA蛋白表达的序列优化方法,能够解决因mRNA分子不稳定,容易降解,从而导致蛋白表达量低的问题。
本发明授权一种利用RNA结合蛋白增强mRNA蛋白表达的序列优化方法在权利要求书中公布了:1.一种利用RNA结合蛋白增强mRNA蛋白表达的序列优化方法,其特征在于,包括以下步骤: S1、设计mRNA的DNA模板序列,构建表达荧光素酶的质粒; S2、设计引物,应用PCR反应,从质粒上扩增出载体的线状基因片段,应用Gibson反应,连接线状基因片段和ARE,使线状基因片段插入ARE,并将质粒转化进感受态细胞;其中ARE的核苷酸序列如SEQIDNO.12所示,ARE的插入位置为3’UTR的前面; S3、提取质粒,酶切线性化,加入酶、核苷酶、缓冲液原料体外转录出mRNA; S4、mRNA和脂质体以一定比例混合,合成脂质纳米粒; S5、转染细胞,mRNA在细胞内翻译出蛋白质; 添加荧光素底物试剂,充分裂解细胞,酶标仪检测化学发光,使用RNApulldown验证ARE是否结合HuR蛋白; 上述序列优化方法用于提高蛋白质表达和增强mRNA的稳定性。
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