独步吾奇生物医疗科技(江苏)有限公司董群获国家专利权
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龙图腾网获悉独步吾奇生物医疗科技(江苏)有限公司申请的专利一种人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118063586B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-24发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410401413.4,技术领域涉及:C07K14/50;该发明授权一种人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法是由董群;戴斌设计研发完成,并于2024-04-03向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法,所述制备方法包括:培养表达人碱性成纤维细胞生长因子的宿主细胞,诱导所述宿主细胞表达人碱性成纤维细胞生长因子,破碎细胞并收集沉淀,获得粗蛋白,对粗蛋白进行纯化回收所述人碱性成纤维细胞生长因子;所述纯化包括依次进行第一层析和第二层析,所述第一层析的填料包括苯基琼脂糖凝胶等,所述第二层析的填料包括DEAE琼脂糖凝胶等。本发明针对人碱性成纤维细胞生长因子,设计全新的发酵及纯化工艺,有效提高了目标蛋白的纯度,降低了内毒素含量,纯度可达95%以上,内毒素含量低于10EUmg,适合规模化工业生产。
本发明授权一种人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法在权利要求书中公布了:1.一种人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括: 培养表达人碱性成纤维细胞生长因子的宿主细胞,诱导所述宿主细胞表达人碱性成纤维细胞生长因子,破碎细胞并收集沉淀,获得粗蛋白,对粗蛋白进行纯化回收所述人碱性成纤维细胞生长因子; 所述培养包括菌种复苏和发酵培养;所述发酵培养的条件包括:温度为36~38℃,pH值为6.8~7.2,DO串联转速维持DO≥30%,当OD600为7以上、溶氧升速且pH升高≥0.1单位min,进行补料,第1h流速95~105mLh,随后调节流速100~200mLh,通气量自动调节以维持30~40%的DO; 所述诱导的诱导剂包括异丙基-β-D-硫代半乳糖苷;所述的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的工作浓度为1~25mM;所述诱导的温度为36~43℃;所述诱导的时间为2~5h; 所述收集沉淀后还包括提取包涵体的步骤;所述提取包涵体包括将收集到的沉淀与包涵体溶解液混合,收集上清液,得到包涵体溶液;所述包涵体溶解液含有三羟甲基氨基甲烷、NaCl、EDTA和盐酸胍; 所述纯化包括依次进行第一层析和第二层析,所述第一层析的填料包括苯基琼脂糖凝胶、丁基琼脂糖凝胶、正丁烷基琼脂糖凝胶或正辛烷基琼脂糖凝胶中任意一种或至少两种的组合,所述第二层析的填料包括DEAE琼脂糖凝胶、Q琼脂糖凝胶或QAE琼脂糖凝胶中任意一种或至少两种的组合; 所述纯化后还包括复性的步骤; 所述复性包括进行第三层析,所述第三层析的填料包括SP琼脂糖凝胶XL。
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