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龙图腾网获悉北京大学;北京大学成都前沿交叉生物技术研究院申请的专利一种同片无偏方式结合空间转录组与CRISPR筛选的方法及其在基因功能验证中的应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119193789B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-20发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411386202.4，技术领域涉及：C12Q1/6869；该发明授权一种同片无偏方式结合空间转录组与CRISPR筛选的方法及其在基因功能验证中的应用是由曾泽贤;张皓睿;张宗旭;薛腾设计研发完成，并于2024-09-30向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种同片无偏方式结合空间转录组与CRISPR筛选的方法及其在基因功能验证中的应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种同片无偏方式结合空间转录组与CRISPR筛选的方法及其在基因功能验证中的应用，属于生物技术领域。本发明步骤包括：使目标细胞感染CRISPR筛选文库病毒；分选出阳性感染的目标细胞并培养至敲除发生后一段时间；将前述步骤得到的目标细胞注入实验动物体内，所述实验动物为自身免疫缺失的动物；取出目标细胞浸润后的组织，制备冷冻切片；将冷冻切片转移至空间转录组载片上并上机，制得空间转录组cDNA文库；利用空间转录组cDNA文库构建普通转录组文库和CRISPRsgRNA文库；分别对普通转录组文库和CRISPRsgRNA文库进行测序和基因序列比对，得到携带空间坐标的普通转录组测序数据和CRISPRsgRNA文库测序数据。

本发明授权一种同片无偏方式结合空间转录组与CRISPR筛选的方法及其在基因功能验证中的应用在权利要求书中公布了：1.一种同片无偏方式结合空间转录组与CRISPR筛选的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：使目标细胞感染CRISPR筛选文库病毒；S2：分选出阳性感染的目标细胞并培养一段时间；S3：将S2步骤得到的目标细胞注入实验动物体内，所述实验动物为自身免疫缺失的动物；S4：取出目标细胞浸润后的组织，制备冷冻切片；S5：将冷冻切片转移至空间转录组载片上并上机，制得TotalcDNA文库；S6：利用TotalcDNA文库构建普通转录组文库和CRISPRsgRNA文库；S7：分别对普通转录组文库和CRISPRsgRNA文库进行测序和基因序列比对，得到携带空间坐标的普通转录组测序数据和CRISPRsgRNA文库测序数据；其中，所述利用TotalcDNA文库构建CRISPRsgRNA文库经过富集，所述富集的方法具体为：通过引物对PCR扩增所述TotalcDNA中CRISPRsgRNA文库，所述引物对的反向引物与TotalcDNA文库中所有cDNA在正义链的3’端的共有序列结合，所述引物对中的正向引物与CRISPRsgRNA文库中5’端的共有特异性序列结合，进行若干次所述PCR扩增，并且在每一次PCR扩增结束后通过磁珠筛选序列，逐步提高CRISPRsgRNA文库的浓度；用目标片段的两端作为环化序列，用splint-ligation的方法在T4连接酶的催化下进行环化，并通过DNA核酸外切酶消化未环化的产物，得到较高纯度的单链环状DNA，以单链环状DNA进行双端特异性引物扩增即可得到较高纯度的CRISPRsgRNA文库。

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