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龙图腾网获悉北京元延医药科技股份有限公司;北京康海制药有限公司申请的专利重组巴曲酶及其高表达量工业级规模制备的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119020334B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-20发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411497778.8，技术领域涉及：C12N9/64；该发明授权重组巴曲酶及其高表达量工业级规模制备的方法是由毕世鸿;王立强;晏四平;李芳设计研发完成，并于2024-10-25向国家知识产权局提交的专利申请。

本重组巴曲酶及其高表达量工业级规模制备的方法在说明书摘要公布了：本发明涉及重组巴曲酶及其高表达量工业级规模制备的方法。具体地说，本发明涉及的制备重组巴曲酶的方法是通过人工合成巴曲酶的结构基因序列，然后使用毕赤酵母克隆表达筛选获得高表达工程菌的种子液，再按如下操作发酵培养制备重组巴曲酶：一级种子液制备、二级种子液制备、发酵罐接种和预培养、甘油补料培养、甲醇补料诱导培养、浓缩获得包含重组巴曲酶的发酵浓缩液并任选地对其纯化。该重组巴曲酶在临床上可以用于急性脑梗死、用于改善各种闭塞性血管病如血栓闭塞性脉管炎、深部静脉炎、肺栓塞等引起的缺血性症状、用于改善末梢及微循环障碍如：突发性耳聋、晕动病。本发明方法巴曲酶的表达量高，可以容易地实现工业规模级的生产。

本发明授权重组巴曲酶及其高表达量工业级规模制备的方法在权利要求书中公布了：1.制备重组巴曲酶的方法，其通过人工合成巴曲酶的结构基因序列，然后使用毕赤酵母克隆表达筛选获得高表达工程菌的种子液，再按如下操作发酵培养制备重组巴曲酶：1一级种子液制备：将筛选的工程菌接种于YPD培养基中，摇瓶培养至OD600达到7-9，作为一级种子液；2二级种子液制备：将一级种子液接种于YPD培养基中，摇瓶培养至OD600达到7-9，作为二级种子液；3发酵罐接种和预培养：将二级种子液接种到发酵罐的发酵培养基中，以30℃、pH5.8~6.2、转速150~220rpm、空气通气量0.8~1.2vvm的初始培养条件进行培养，在发酵过程中逐渐提高转速和空气通气量，并控制溶氧在15~25%范围内，直至转速提升至650~750rpm、空气通气量提升至1.8~2.5vvm，然后继续培养至碳源耗尽，接下来进行甘油补料培养；4甘油补料培养：开始以5mlhL的速率滴加含PTM1溶液10~14mlL的50%甘油进行补料，在30min内逐步提升补料速度至45~55mlhL，期间调整转速和空气通气量使溶氧控制在15~25%范围内，继续培养至菌体湿重达到250~270gL范围内，进入接下来的甲醇补料；5甲醇补料诱导培养：使发酵液温度降至25℃、pH调至2.8~3.2，以2.8~3.5mlhL的速率滴加含PTM1溶液10~14mlL的甲醇，保持此甲醇补料速度直至发酵结束，期间调整转速和空气通气量使溶氧控制在15~25%范围内，并在转速和空气通气量均达到最大后开始通入氧气使通气量最高0.28~0.32vvm；发酵结束后，将发酵液离心，收集上清液；6将离心上清液用截留分子量为10K的超滤膜包超滤，浓缩至膜上液体积至初始上清液体积的110，得到包含重组巴曲酶的发酵浓缩液，任选地对其纯化；其中，所用YPD培养基的组成为：1%蛋白胨、0.5%酵母膏、2%葡萄糖、水，盐酸或氢氧化钠调节pH6.0±0.2；所用发酵培养基的组成为：85%磷酸13mlL、二水硫酸钙0.46gL、硫酸钾9.1gL、七水硫酸镁7.46gL、氢氧化钾2.06gL、甘油30.0gL、PTM1溶液4.35mlL、余量水；所用PTM1溶液的组成为：硫酸铜6gL、碘化钠0.088gL、硫酸锰3gL、钼酸钠0.2gL、硼酸0.02gL、氯化钴0.5gL、氯化锌20gL、硫酸亚铁65gL、生物素0.2gL、肌醇1.2gL、泛酸钙2.5gL、余量水。

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