买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

龙图腾网获悉杭州师范大学;杭州联川生物技术股份有限公司申请的专利一种小鼠结直肠组织单细胞悬液解离试剂盒及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN117586942B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202311540204.X，技术领域涉及：C12N5/071；该发明授权一种小鼠结直肠组织单细胞悬液解离试剂盒及其应用是由荣圣予;郎秋蕾;何炳楠;朱琳达设计研发完成，并于2023-11-17向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种小鼠结直肠组织单细胞悬液解离试剂盒及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种小鼠结直肠单细胞悬液的解离试剂盒，由如下组分组成：第一酶解液、第二酶解液、第三酶解液、PBS缓冲液、RPMI‑1640培养基以及红细胞裂解液；第一酶解液为浓度20mM的EDTA溶液；第二酶解液为浓度0.25％的胰蛋白酶‑EDTA溶液；第三酶解液中中性蛋白酶浓度为100mgmL、胶原酶I浓度为100mgmL、胶原酶II浓度为100mgmL；还公开了采用该解离试剂盒提取小鼠结直肠单细胞悬液的方法。该试剂盒中的解离液所用试剂材料易获取，无有害成分，安全环保，方法操作简单，各步骤配合后的最终结果有很高的重复性和成功率，能够稳定地得到高活率且杂质低的小鼠结直肠单细胞悬液。

本发明授权一种小鼠结直肠组织单细胞悬液解离试剂盒及其应用在权利要求书中公布了：1.一种制备小鼠结直肠单细胞悬液的方法，其特征在于，包括如下步骤： S1.试剂准备：将冷藏的第一酶解液、第二酶解液、第三酶解液置于冰上解冻，第一酶解液采用PBS稀释至工作浓度；第二酶解液、第三酶解液采用RPMI-1640培养基稀释至工作浓度； S2.样本准备：取无血渍和杂质的小鼠结直肠于样本管a中，在冰上处理成碎块后用PBS溶液反复清洗至干净； S3.第一次消化：向样本管a中加入2-4ml第一解离液，恒温水浴震荡消化，取出后吸取样本管a中所有溶液过细胞筛，筛网上的剩余组织装入样本管b中备用，过筛滤液装入样本管c中离心后弃上清，用PBS重悬细胞沉淀，再次离心后弃上清，再用RPMI-1640培养基重悬细胞沉淀，得到细胞悬液A； S4.第二次消化：向S3样本管c中的细胞悬液A中加入2-4mL第二解离液，恒温水浴震荡消化；取出后将样本管c中所有溶液过细胞筛，过筛滤液离心后弃上清，用RPMI-1640培养基重悬细胞沉淀，得到细胞悬液B； S5.第三次消化：向S3中样本管b中的剩余组织中加入2-4mL第三解离液，恒温水浴震荡消化；取出后吸取样本管b中所有溶液过细胞筛，过筛滤液离心后弃上清，用RPMI-1640培养基重悬细胞沉淀，得到细胞悬液C； S6.红细胞裂解：将细胞悬液B，细胞悬液C合并到样本管d中，加入5-10ml红细胞裂解液，常温裂解后离心弃上清； S7.单细胞悬液：向样本管d中加入PBS溶液吹打混匀，离心后弃上清，用RPMI-1640培养基重悬细胞沉淀，即得到单细胞悬液； 所述第一次消化步骤中，第一解离液的工作浓度为10-20mM的EDTA溶液，消化方法为：置于水浴恒温震荡仪中，37℃，120rpm条件下震荡消化8-12min； 所述第二次消化步骤中，第二解离液的工作浓度为0.1-0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，消化方法为：置于水浴恒温震荡仪中，37℃，120rpm条件下震荡消化1-3min； 所述第三次消化步骤中，第三解离液的工作浓度为胶原酶I0.5-2mgmL、胶原酶II0.5-2mgmL、中性蛋白酶0.5-2mgmL，消化方法为：置于水浴恒温震荡仪中，37℃，120rpm条件下震荡消化8-12min。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术，可联系本专利的申请人或专利权人杭州师范大学;杭州联川生物技术股份有限公司，其通讯地址为：311121 浙江省杭州市余杭区余杭塘路2318号；或者联系龙图腾网官方客服，联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。