大连理工大学;烟台新药创制山东省实验室吴成君获国家专利权
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龙图腾网获悉大连理工大学;烟台新药创制山东省实验室申请的专利一种突触囊泡的提取方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118185873B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410346628.0,技术领域涉及:C12N5/0793;该发明授权一种突触囊泡的提取方法是由吴成君;赵璇竹;吴振永;郭鹏;盛子真设计研发完成,并于2024-03-26向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种突触囊泡的提取方法在说明书摘要公布了:本发明提供一种突触囊泡的提取方法,包括如下步骤:步骤1:用均质缓冲液匀浆鼠脑;步骤2:第一离心,收集第一上清液;步骤3:第二离心,收集第二上清液和沉淀;步骤4:向沉淀中加入ddH2O,匀浆;步骤5:进行第三离心,收集第三上清液,得到上清液;步骤6:收集第二和第三上清液进行第四离心,收集第四上清液;步骤7:用Optiprep密度梯度离心法对第四上清液进行纯化;步骤8:选取囊泡含量最高的一层,过柱洗脱。通过该提取方法,可以高效地从离体哺乳动物脑中提取突触囊泡样品,该突触囊泡在蛋白中的含量高,在25%以上,甚至30%以上,突触囊泡纯度高。本发明还提供了上述提取方法提取的突触囊泡。
本发明授权一种突触囊泡的提取方法在权利要求书中公布了:1.一种突触囊泡的提取方法,其特征在于,包括如下步骤: 步骤1):用均质缓冲液,匀浆鼠脑; 步骤2):第一离心,收集第一上清液; 步骤3):对步骤2)得到的第一上清液进行第二离心,收集第二上清液和沉淀; 步骤4):向步骤3)得到的沉淀中加入ddH2O,匀浆; 步骤5):对步骤4)得到的溶液进行第三离心,收集第三上清液,得到上清液; 步骤6):对步骤5)得到的上清液进行第四离心,收集第四上清液; 步骤7):用Optiprep密度梯度离心法对步骤6)得到的第四上清液进行纯化; 步骤8):选取囊泡含量最高的一层,过柱洗脱,色谱柱填料为Controlledporeglass-BETspecificsurfaceareaNIST2206; 所述步骤7)中,用Optiprep密度梯度离心法对步骤6)得到的第四上清液进行纯化,包括:配制梯度浓度的Optiprep离心液,向离心管中分别加入梯度浓度的Optiprep离心液,将所述第四上清液加入梯度浓度的Optiprep离心液的最上层,进行第五离心; 所述步骤7)中,离心管中自上到下Optiprep离心液的质量浓度依次为:10%、18%、22-27%、30%; 所述步骤8)中,所述洗脱为等度洗脱,洗脱液包含250-300mM的甘氨酸,3-7mM的HEPES,洗脱液PH为7-8。
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